牛源A型多杀性巴氏杆菌(Pm12)灭活疫苗的制备及小鼠攻毒保护试验

Preparation of Bovine type A Pm12 inactivated vaccine and attack test in mice

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摘要为了防控新疆北疆A型多杀性巴氏杆菌(Pm)引起的牛纤维素性化脓性肺炎,分析制备的A型Pm12 灭活疫苗在试验小鼠体内抗体产生情况和保护作用,试验按细菌灭活疫苗制备程序将分离筛选自新疆北疆部分地区发病牛场的1 株毒性强、免疫原性好的牛源A型Pm12 制备成灭活疫苗,并进行安全检验.根据棋盘法对全菌抗原包被浓度、封闭液、血清稀释度、酶标二抗工作浓度、封闭时间、一抗孵育时间、二抗孵育时间及底物反应时间等检测条件进行筛选,建立检测小鼠血清抗体的间接ELISA方法,用建立的间接ELISA方法测定免疫小鼠血清抗体产生规律,对免疫小鼠以不同半数致死量(LD50)的Pm12 进行攻毒保护试验,同时用A型和B型Pm对免疫小鼠进行交叉保护试验.结果表明:制备的牛源A型Pm12 灭活疫苗含菌量为8×109cfu/mL,安全检测合格.根据棋盘法确定全菌抗原包被浓度为1∶25,最佳血清稀释度为 1∶320～1∶640,最适封闭液为 5%BSA,最适封闭时间为1 h,血清最适作用时间为1 h,酶标抗体最适稀释度为1∶3 000,底物最适作用时间为 15 min;用制备的疫苗免疫小鼠后,60 天的血清抗体效价均高于 28 天水平;Pm12 灭活苗对不同LD50 攻毒小鼠的保护率为80%、80%、50%,对A型Pm保护率为80%,对B型Pm的交叉保护率为60%.说明可用试验建立的方法检测小鼠血清抗体水平,制备的牛源A型Pm12 灭活疫苗能够诱导小鼠产生较高水平且持续较长时间的血清抗体,能够有效保护小鼠对抗A型Pm感染,且对B型Pm呈现部分交叉保护作用.