首页 > 联勤军事医学 > miR-26a-5p靶向TLR4/MyD88/NF-κB通路对IL-1β诱导的骨关节炎软骨细胞增殖、凋亡、成骨分化的影响

miR-26a-5p靶向TLR4/MyD88/NF-κB通路对IL-1β诱导的骨关节炎软骨细胞增殖、凋亡、成骨分化的影响

Effects of miR-26a-5p on Proliferation,Apoptosis,and Osteogenic Differentiation of IL-1β-induced Chondrocytes in Osteoarthritis by Targeting TLR4/MyD88/NF-κB Pathway

二维码有效期 120s

摘要目的探讨微小 RNA-26a-5p(microRNA-26a-5p,miR-26a-5p)靶向 Toll 样受体 4(Toll-like receptor 4,TLR4)/髓样分化因子 88(myeloid differentiation factor 88,MyD88)/核转录因子 KB(nuclear factor kappa-B,NF-κB)通路对白细胞介素 1p(interleukin-1β,IL-1β)诱导的骨关节炎(osteoarthritis,OA)软骨细胞增殖、凋亡、成骨分化的影响.方法将人关节软骨细胞HC-A 随机分为对照组、IL-1β 组、miR-NC 组、miR-26a-5p mimics 组、miR-26a-5p mimics+pcDNA 组、miR-26a-5p mimics+TLR4组.除对照组外,其余组细胞以10 ng/ml IL-1β诱导24 h构建OA细胞模型.采用逆转录-聚合酶链式反应(re-verse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)检测各组细胞 miR-26a-5p、TLR4 以及碱性磷酸酶(alkaline phospha-tase,ALP)、Runt 相关转录因子 2(Runt-related transcription factor 2,RUNX2)、骨桥蛋白(osteopontin,OPN)mRNA 表达水平;酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测细胞炎性因子水平;细胞计数试剂盒8(cell counting kit-8,CCK-8)检测细胞增殖能力;流式细胞术检测细胞凋亡情况;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞中TLR4、MyD88、NF-κB 和活化型半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶 3(cleaved cysteine aspartate protein kinase 3,C-Caspase-3)蛋白表达量;双荧光素酶报告实验验证miR-26a-5p与TLR4的靶向关系.结果与对照组比较,IL-1β组细胞miR-26a-5p水平以及ALP、RUNX2和OPN表达水平、细胞活力下降(P均＜0.05),细胞炎性因子水平、TLR4、MyD88、NF-κB p65和C-Caspase 3蛋白表达量、细胞凋亡率升高(P均＜0.05);与miR-NC组比较,miR-26a-5p mimics组细胞ALP、RUNX2和OPN表达水平、细胞活力升高(P均＜0.05),细胞炎性因子水平、TLR4、MyD88、NF-κB P65、C-Caspase-3、细胞凋亡率下降(P均＜0.05);与miR-26a-5p mimics+pcDNA 组比较,miR-26a-5p mimics+TLR4 组细胞 ALP、RUNX2 和 OPN 表达水平、细胞活力下降(P均＜0.05),细胞炎性因子水平、TLR4、MyD88、NF-κB P65、C-Caspase-3、细胞凋亡率升高(P均＜0.05).结论 OA软骨细胞中miR-26a-5p水平下降,过表达miR-26a-5p可通过靶向TLR4/MyD88/NF-κB通路促进软骨细胞增殖、成骨分化,抑制细胞凋亡和炎症反应.