换一批
换一批牛白细胞介素-17真核表达载体的构建及在牛乳腺上皮细胞中的表达
Construction of bovine interleukin-17 eukaryotic expression vector and its expression in the bovine primary mammary epithelial cells
摘要[目的]在体外分离培养牛乳腺上皮原代细胞，并构建牛白细胞介素-17（ bIL-17）基因真核表达质粒，观察重组质粒在牛乳腺上皮细胞的表达．[方法]提取牛脾脏细胞总RNA，通过RT-PCR扩增bIL-17，将bIL-17连入pMD19-T进行测序，测序成功后将bIL-17插入含有增强型绿色荧光蛋白报告基因的真核表达质粒pEGFP-N3上，构建真核表达质粒pEGFP-N3-bIL-17．用脂质体法将pEGFP-N3-bIL-17质粒转染于牛乳腺上皮细胞，荧光显微镜观察绿色荧光蛋白在细胞中的表达，RT-PCR检测bIL-17基因在细胞内的转录，定量ELISA检测bIL-17蛋白在细胞内的表达情况．[结果和结论]成功构建具有绿色荧光和新霉素抗性的双选择标记的牛白细胞介素-17真核表达载体，并可在牛乳腺上皮细胞成功表达．
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关键词
牛白细胞介素-17载体构建牛乳腺上皮细胞转染表达bovine interleukin-17 ( bIL-17 )vector constructionbovine primary mammary epithelial celltransfectionexpression
分类号
S852.42
栏目名称
生物学? 食品科学
发布时间
2014-01-07
基金项目
国家自然科学基金(30901066)
内蒙古自然科学基金
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