猪传染性胃肠炎病毒TaqMan荧光定量PCR方法的建立及在疫苗评价中的应用

Development of TaqMan-based Real-time PCR Assay for Detecting Transmissible Gastroenteritis Virus and lts Application in Vaccine Evaluation

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摘要[目的]建立检测猪传染性胃肠炎病毒（transmissible gastroenteritis virus, TGEV）的 TaqMan荧光定量 PCR方法。[方法]根据TGEV基因组中保守的 N基因序列设计引物和探针，以梯度稀释的含有 N基因的重组质粒作为标准品，进行定量 PCR反应。[结果]该试验建立的荧光定量 PCR方法在102~1010拷贝/μl之间具有良好的线性关系，相关系数达到0.99以上，扩增效率在90%~110%之间。该方法的检测灵敏度为10拷贝，敏感性较高，而且特异性较好，与猪的其他病毒核酸均无交叉反应；批内和批间的变异系数低于3%，表明该方法的重复性较好。应用该方法可以对疫苗的免疫效力进行定量检测和评价，也可以对临床病料进行检测。[结论]该研究建立的荧光定量 PCR方法灵敏度高、特异性好，可为TGEV的流行病学调查、疫苗开发和发病机制等研究提供可靠的工具。