换一批
换一批耐有机溶剂脂肪酶基因lipI的克隆及其在毕赤酵母中的高效表达
Cloning and High-level Expression of Methanol-tolerant Lipase Gene lipI in Pichia pastoris
摘要为了实现耐有机溶剂脂肪酶基因的真核表达,参照GenBank公布的脂肪酶基因序列设计简并引物,通过PCR扩增出G.geotrichum SXL-107的全长1 692 bp、编码563个氨基酸的脂肪酶基因lipI,基因登录号为JX074060.利用Signal P 3.0软件对lipI基因序列进行分析,将去除自身信号肽的成熟lipI基因克隆到诱导型表达载体pPIC9K上,构建胞外重组表达载体pPIC9K-lipI,转化毕赤酵母KM71,发酵培养72 h,发酵上清液中脂肪酶活力达到70 U/mL,与野生型脂肪酶产生菌Galactomyces geotrichum SXL-107相比,脂肪酶活力提高7倍.获得的重组脂肪酶的最适温度40℃、pH值为6.5,在10％的甲醇溶液中作用48 h后仍然保持60％以上的酶活力.
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分类号
S816.73
栏目名称
畜牧·兽医
DOI
10.3969/j.issn.1004-3268.2013.06.036
发布时间
2013-08-16
基金项目
陕西省科学院应用基础研究项目
中国科学院西部之光人才培养项目
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