换一批
换一批鸡 PD 1胞外区基因的克隆表达及其蛋白生物学活性鉴定
Cloning,Prokaryotic Expression and Biologic Activity Identification of Chicken PD-1 Extracellular Region Gene
摘要为研究鸡程序性细胞死亡因子1（PD 1）胞外区的生物学活性，根据 GenBank 中的鸡 PD 1基因序列，经生物信息学比对分析，设计鸡 PD 1胞外区特异性克隆引物，扩增目的基因，连接原核表达载体 pET 28a（＋），构建重组表达载体 pET 28a PD 1，转化至 Rosetta（DE3）大肠杆菌，并对IPTG 浓度、诱导温度、诱导时间进行优化，对表达产物进行 SDS PAGE 和 Western blot 分析，应用流式细胞术对所获得重组蛋白的生物学活性进行鉴定。结果显示，成功克隆了鸡 PD 1胞外区基因；SDS PAGE 和 Western blot 分析结果表明，37℃、0．1 mmol/L IPTG 诱导4 h 时，PD 1胞外区融合蛋白表达量最高，以包涵体形式存在；流式细胞术分析结果表明，PD 1胞外区重组蛋白具有一定的生物学活性。
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关键词
鸡程序性细胞死亡因子 1胞外区克隆原核表达生物学活性chickenPD-1extracelluar regioncloneprokaryotic expressionbiological activity
分类号
S855.3
DOI
10.3969/j.issn.1004-3268.2014.10.026
发布时间
2014-11-21
基金项目
国家自然科学基金项目
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