换一批Ⅰ型鸭甲型肝炎病毒VP1基因在昆虫细胞中的表达及鉴定
Expression and Identification of VP1 Gene of Duck Hepatitis A Virus Type Ⅰ in Insect Cells
摘要为在昆虫细胞中表达Ⅰ型鸭甲型肝炎病毒(DHAV-Ⅰ)的主要结构蛋白VP1,根据GenBank已发表的DHAV-Ⅰ SH株VP1基因序列,设计1对特异性引物,通过RT-PCR扩增VP1基因,将其克隆至杆状病毒转移载体pFastBac1,获得重组杆状病毒转移载体pFB-VP1,将其转化E.coliDH10Bac感受态细胞,经抗性、蓝白斑筛选及PCR鉴定后,构建重组穿梭质粒rBacmid-VP1.在脂质体介导下将重组质粒rBacmid-VP1转染昆虫细胞Sf 9,制备含有DHAV-ⅠVP1基因的重组杆状病毒rBac-VP1.Western blot结果显示,表达的重组蛋白VP1大小约27 ku,能与DHAV-ⅠVP1多克隆抗体发生特异性反应;间接免疫荧光检测结果显示,重组蛋白VP1能与DHAV-Ⅰ全病毒阳性血清发生特异性反应,细胞内出现较强的荧光.以上结果表明,在昆虫细胞中成功表达了具有免疫原性的DHAV-Ⅰ主要结构蛋白VP1.
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分类号
S852.65+9
栏目名称
DOI
10.15933/j.cnki.1004-3268.2018.01.020
发布时间
2018-06-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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