换一批
换一批猪瘟病毒E2蛋白在大肠杆菌中的表达及免疫原性分析
Expression of Classical Swine Fever Virus E2 Protein in Escherichia coli and Analysis of Its Immunogenicity
摘要为制备具有免疫原性的猪瘟病毒E2蛋白,在大肠杆菌中表达E2蛋白,并对其进行纯化及免疫原性分析.将E2基因插入原核表达载体pET-28a,构建重组质粒pET-28a-E2,将其转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞进行诱导表达,SDS-PAGE电泳和Western blot分析结果显示,成功表达了可溶性E2蛋白.对IPTG浓度及诱导温度和时间进行优化,结果显示,IPTG终浓度为0.1 mmol/L时,18 ℃条件下诱导表达16 h,E2蛋白的可溶性表达量最高.通过分子筛一步纯化E2蛋白,其终质量浓度为0.5 g/L.Western blot分析和间接ELISA结果显示,纯化后的E2蛋白在变性及非变性条件下都能够被猪瘟阳性血清特异性识别,表明纯化后的E2蛋白活性良好.将纯化后的E2蛋白添加弗氏佐剂乳化后免疫BALB/C小鼠,采集血清进行病毒中和试验,结果显示,免疫后56 d 产生较高水平的中和抗体,表明E2蛋白免疫原性良好.综上,成功利用大肠杆菌BL21(DE3)菌株表达了可溶性E2蛋白,且纯化后的E2蛋白免疫原性良好.
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关键词
猪瘟病毒E2蛋白蛋白质纯化血清学分析免疫原性Classical swine fever virus (CSFV)E2 proteinProtein purificationSerological analysisImmunogenicity
分类号
S855.3
栏目名称
DOI
10.15933/j.cnki.1004-3268.2018.03.025
发布时间
2018-06-20
基金项目
河南省重大科技专项（141100110100）
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