换一批抗猪瘟病毒中和性单克隆抗体的制备与鉴定
Preparation and Identification of Neutralizing Monoclonal Antibodies against Classical Swine Fever Virus
摘要为了获得具有中和活性的抗猪瘟病毒(CSFV)单克隆抗体,分别将CSFV和杆状病毒表达系统表达纯化的CSFV E2蛋白与佐剂混合后免疫BABL/c小鼠,经杂交瘤细胞融合制备抗CSFV单克隆抗体,经过多轮亚克隆和免疫过氧化物酶单层试验(IPMA)筛选,成功获得5D1、8H7、9A1和13B2共4株能够稳定分泌抗CSFV单克隆抗体的杂交瘤细胞株.4株单克隆抗体轻链均属于 κ型,其中5D1、8H7、13B2为IgG1亚型,9A1为IgG2c亚型.间接ELISA检测结果显示,4株单克隆抗体的腹水效价在2.56×105～1.02×106;IPMA效价分别为6.40×104、1.28×105、2.56×105、1.28×105;SDS-PAGE和Western blot检测结果显示,4株单克隆抗体均能与经原核表达系统及杆状病毒表达系统获得的CSFV E2蛋白发生特异性反应;IPMA检测结果显示,4株单克隆抗体均能与CSFV发生特异性反应,而与牛流行性腹泻病毒(BVDV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)和猪圆环病毒(PCV2)均无交叉反应.病毒中和试验证实,单克隆抗体13B2具有中和活性,其中和效价为1.28×104.综上,成功筛选出4株能够分泌抗CSFV特异性抗体的杂交瘤细胞株,其中单克隆抗体13B2具有中和CSFV感染活性.
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