换一批禽腺病毒血清4型SYBR Green I荧光定量PCR检测方法的建立与应用
Development and Application of SYBR Green Ⅰ-Based Real-time PCR Assay Method for Detection of Fowl Adenovirus Serotype 4
摘要为建立禽腺病毒血清4型(Fowl adenovirus serotype 4,FAdV4)临床检测方法,根据GenBank中该病毒Hexon基因序列设计扩增引物,将扩增的Hexon基因连接至pEASY-Blunt载体,构建重组质粒pEASY-Blunt-Hexon,同时对Hexon基因进行分析,选取高度保守区域,设计荧光定量检测引物,建立FAdV4 SYBR Green I荧光定量PCR检测方法.该方法扩增产物长度为95 bp,最低检测下限为7.1×102拷贝/μL,且与其他禽源病毒无交叉反应,批内和批间重复性试验变异系数均不超过2％,具有良好的特异性和重复性.将建立的检测方法应用于检测FAdV4在鸡肝癌细胞(Leghorn male hepatocellular cells,LMH)上的增殖特性,并与TCID50法测定的病毒滴度进行比较,结果显示,2种检测方法具有良好的相关性.综上,本研究建立的检测方法可用于FAdV4的临床早期快速检测.
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分类号
S852.65
栏目名称
DOI
10.15933/j.cnki.1004-3268.2022.12.015
发布时间
2023-02-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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