猪伪狂犬病病毒gE蛋白的真核表达及其活性鉴定

Eukaryotic Expression of Porcine Pseudorabies Virus gE Protein and Identification of Its Activity

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摘要为制备猪伪狂犬病病毒(PRV)gE重组蛋白并评估其抗原活性,将优化的PRV gE基因胞外区插入真核表达载体pCMV并在其C端加入Hexa-His标签,构建真核表达质粒pCMV-gE;将重组质粒转染HEK293F细胞,Dot blot鉴定转染细胞中gE重组蛋白的分泌表达;利用镍亲和层析和凝胶过滤层析从转染细胞培养上清中纯化gE表达蛋白;以SDS-PAGE和Western blot鉴定gE重组蛋白,利用PRV阳性血清以ELISA分析gE重组蛋白的抗原活性,通过去糖基化酶PNGase F鉴定其糖基化修饰及其对抗原活性的影响.Dotblot结果显示,gE重组蛋白通过自身信号肽实现在细胞培养上清的分泌表达,其表达量在转染96 h达到峰值.SDS-PAGE和Western blot结果显示,从细胞培养上清中纯化获得gE重组蛋白纯度约为90％,经去糖基化酶PNGase F处理的gE重组蛋白分子质量显著降低.间接ELISA结果显示,gE重组蛋白检测PRV阳性血清的抗体效价为1∶ 12 800;PRV阳性血清对gE蛋白的检出限为31.25 ng/mL,其抗原活性是原核表达的4倍.对临床血清的检测结果显示,基于gE重组蛋白的ELISA与IDEXX抗体检测试剂盒的符合率为96.5％.综上,在真核细胞中分泌表达了具有高表达量、高纯度、高活性和糖基化修饰的gE重组蛋白,在PRV感染鉴别检测中具有良好的应用潜力.

作者 王清龙 ^[1] 王瑞宁 ^[2] 王勋 ^[3] 李青梅 ^[4] 李鸽 ^[5] 张真真 ^[6] 杨苏珍 ^[4] 郭军庆 ^[4] 张改平 ^[7] 学术成果认领

作者单位 河南牧业经济学院,河南郑州450011 ^[1] 河南牧业经济学院,河南郑州450011;河南省农业科学院动物免疫学重点实验室,河南郑州450002 ^[2] 河南省农业科学院动物免疫学重点实验室,河南郑州450002;河南农业大学动物医学院,河南郑州450002 ^[3] 河南省农业科学院动物免疫学重点实验室,河南郑州450002 ^[4] 西北农林科技大学动物医学院,陕西杨凌712100 ^[5] 河南农业大学动物医学院,河南郑州450002 ^[6] 河南省农业科学院动物免疫学重点实验室,河南郑州450002;河南农业大学动物医学院,河南郑州450002;扬州大学江苏高校动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心,江苏扬州225009 ^[7]

关键词猪伪狂犬病病毒 gE蛋白分泌表达糖基化修饰抗原活性

分类号 S852.65

栏目名称 畜牧·兽医

DOI 10.15933/j.cnki.1004-3268.2023.03.014

发布时间 2023-04-27

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