换一批
换一批摘要目的:构建小鼠Dnd1慢病毒表达载体,以期在哺乳动物细胞中高效、稳定表达.方法:设计引物引入Age Ⅰ酶切位点,使用PCK方法从质粒pcDNA3.1-Dnd1中扩增小鼠Dnd1基因的编码区序列,对所扩增出的目的片段回收纯化.用In-Fusion技术将Age Ⅰ内切酶消化后目的片段交换连接入Age Ⅰ酶切的pGC-FU载体,构建Dnd1慢病毒表达载体pGC-FU-Dnd1.酶切验证并测序正确后,将质粒pGC-FU-Dnd1与慢病毒辅助包装裁体共转染293T细胞,Western-blot验证Dnd1在转染293 T细胞中表达.结果:通过PCK扩增获得了Dnd1基因,将Dnd1克隆到慢病毒转移质粒pGC-FU中,并在293T细胞中包装产生慢病毒颗粒.结论:成功构建了Dnd1慢病毒表达栽体,为进一步从分子水平探讨Dnd1功能奠定了基础.
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分类号
R737
栏目名称
论著
DOI
10.3969/j.issn.1673-016X.2009.04.001
发布时间
2010-04-09
基金项目
湖南师范大学青年优秀人才培养计划
长沙市科技计划
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