换一批人MDM2截短体真核表达载体的构建及其与NLK的相互作用
Construction of human MDM2 Truncated Eukaryotic Expression Vector and Detection of its Interaction with NLK
摘要目的:构建带有HA标签的人MDM2截短体N端和C端重组真核表达载体,并检测截短体与NLK的相互作用.方法:用聚合酶链式反应(PCR)扩增人MDM2基因N端和C端编码序列,通过双酶切方法构建重组真核表达载体,转染至293T细胞,免疫印迹检测蛋白表达,免疫共沉淀检测MDM2截短体与NLK的相互作用.结果:菌落PCR与测序鉴定表明HA-MDM2-N和HA-MDM2-C截短体重组真核表达质粒构建成功,HA-MDM2-N,HA-MDM2-C有特异性表达,HA-MDM2-C与NLK结合较强,HA-MDM2-N与NLK结合较弱.结论:人MDM2截短体N端(MDM2-N)和C端(MDM2-C)均与NLK存在相互作用.
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