换一批
换一批禽源沙门氏菌荧光定量PCR方法的构建及应用
Construction and Application of Fluorescent Quantitative PCR Method for Avian Salmonella
摘要试验旨在建立一种快速检测禽源沙门氏菌SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR(qPCR)的方法,即根据沙门氏菌invA基因的保守序列设计引物,利用普通PCR方法扩增沙门氏菌invA基因保守基因片段,将其克隆到pMD18-T载体上,将获得的重组质粒pMD18-T-invA作为标准阳性模板.经qPCR条件优化后,进行特异性、灵敏性和重复性试验.结果显示,所建立的SYBR Green Ⅰ qPCR方法的Ct值与标准品在1.4～1.4 × 1010拷贝/μL范围内呈良好的线性关系,R2为0.9963,扩增效率为95％,检测下限为1.4拷贝/μL;与大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、链球菌、痢疾志贺菌、多杀性巴氏杆菌无交叉反应;该方法组内变异系数和组间变异系数均小于2.5％;对44份粪便样本和132份蛋液样本进行qPCR方法和常规PCR方法检测,结果显示该qPCR方法的阳性检出率分别为22.7％(10/44)、0.8％(1/132),常规PCR的阳性检出率分别为9.1％(4/44),0％(0/132).结果表明:试验成功建立禽源沙门氏菌qPCR检测方法,可为禽源沙门氏菌的快速检测提供技术支撑.
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关键词
沙门氏菌SYBR Green Ⅰ荧光定量PCRinvA基因检测SalmonellaSYBR Green Ⅰ fluorescence quantitative PCRinvA genedetection
分类号
S852.61
栏目名称
试验研究
DOI
10.3969/j.issn.1006-4907.2024.01.013
发布时间
2024-03-14
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