换一批
换一批带核定位信号的维甲酸受体α与Ubiquilin 1蛋白相互作用的验证
Interaction between nuclear localization signal-retinoic acid receptor α and Ubiquilin 1
摘要目的:验证带有核定位信号的维甲酸受体α(nuclear localization signal-retinoic acid receptor α, NLS-RARα)与Ubiquilin 1(UBQLN1)蛋白之间的相互作用.方法:将表达NLS-RARα诱饵蛋白和UBQLN1靶蛋白的两种重组表达质粒pGBKT7-NLS-RARα及pACT2-UBQLN1共转化AH109酵母菌,通过酵母双杂交技术验证两者在活细胞内的相互作用;构建真核细胞表达载体pCMV-HA-NLS-RARα和pCMV-Myc-UBQLN1,经酶切鉴定后,共转染HEK293细胞,利用抗HA多克隆抗体沉淀,抗Myc单克隆抗体检测验证他们之间的相互作用.结果:pGBKT7-NLS-RARα及pACT2-UBQLN1质粒共转化AH109酵母菌后,可见蓝色阳性克隆;构建的重组表达载体pCMV-HA-NLS-RARα和pCMV-Myc-UBQLN1经酶切鉴定成功,转染HEK293细胞后,用免疫共沉淀技术检测到Myc-UBQLN1蛋白的表达.结论:酵母双杂交和免疫共沉淀技术可验证NLS-RARα与UBQLN1之间存在相互作用.
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主题词
蛋白(Egg White)核定位信号(Nuclear Localization Signals)免疫(Immunity)维甲酸受体α(Retinoic Acid Receptor alpha)细胞(Cells)
分类号
R3
DOI
10.3969/j.issn.1672-7347.2010.07.002
发布时间
2010-09-14
基金项目
National Natural Science Foundation of China（30300449）；
the Traditional Chinese Medicine Foundation of State Administration（02-03ZP52）；
the Fund from Chongqing Medical University（XBYB2007104;XBYB2007108）
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