摘要目的:研究NOR1基因全长及第2外显子选择性剪切异构体在人细胞系和组织中的分布规律以及NOR1蛋白全长及剪切异构体的亚细胞定位模式.方法:以人胎脑cDNA文库质粒为模板,PCR扩增NOR1基因开放阅读框(open reading frame,ORF),酶切后连接pCMV/myc载体.以pCMV/myc-NOR1(isoform 1)质粒为标准品,采用Real-time RT-PCR方法检测NOR1 mRNA在人胚胎组织和成人睾丸组织中的表达.用RT-PCR方法扩增NOR1基因第2外显子两侧序列片段,测序分析NOR1 isoform 1和isoform 2 mRNA在细胞和组织中的分布;PCR方法扩增细胞系NOR1第2外显子基因组序列,测序检测第2外显子gDNA序列.将pCMV/myc-NOR1(isoform 1)和pCMV/myc-NOR1(isoform 2)质粒转染细胞,采用免疫荧光方法观察两种异构体在细胞内定位模式.结果:从人胎脑cDNA文库克隆得到NOR1基因全长ORF(isoform 1)和遗漏第2外显子的剪切异构体(isoform 2).Real-time RT-PCR检测发现成人睾丸组织NOR1 mRNA表达水平最高,胚胎鼻咽、气管、脑、肾组织有中等水平表达,其他组织表达较低.RT-PCR结合测序检测发现表明睾丸、鼻咽、气管、肾等16种组织仅表达isoform 2;而脑组织同时检测到NOR1 isoform 1和isoform 2 mRNA,以isoform 2为主.NP69,HNE1等细胞系仅表达遗漏第2外显子的isoform 2,所有检测的细胞系基因组DNA无第2外显子缺失.免疫荧光检测发现NOR1 isoform 1和isoform 2编码蛋白在细胞内定位模式相似.结论:克隆得到NOR1基因全长和遗漏第2外显子的剪切本.Isoform 2是NOR1基因在组织和细胞系中的主要表达形式,NOR1 isoform 1仅表达于脑组织.第2外显子对NOR1蛋白的细胞内定位模式没有影响.