换一批
换一批翼螺旋转录因子FOXO1的DNA结合域的表达、纯化及结合特性
Expression and purification of FOXO1 DNA binding domain and its DNA properties
摘要目的:探讨翼螺旋转录因子FOXO1的DNA结合域(FOXO1 DNA binding domain,FOXO1-DBD)的表达、纯化及与DNA的结合特性.方法:采用优化FOXO1-DNA的基因序列和低温诱导的方式实现FOXO1-DBD蛋白的可溶性表达,通过镍亲和层析及阳离子交换层析进行纯化,并经凝胶迁移实验(electrophoretic mobility shift assay,EMSA)验证FOXO1-DBD的DNA结合特性.结果:优化后的FOXO1基因在21 ℃时编码的蛋白大多以可溶性方式表达,通过两步纯化即可获得95％以上纯度的FOXO1-DBD蛋白,纯化的蛋白与含FOX家族DNA结合基序(G/ATAAACA)的DNA序列显示良好的结合特性.结论:建立了FOXO1-DBD蛋白高效表达、纯化的方法,验证了FOXO1蛋白在识别DN上的复杂性.
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关键词
FOXO1DNA结合域表达纯化凝胶迁移实验FOXO1DNA binding domainexpression and purificationelectrophoretic mobility shift assay
栏目名称
论著
DOI
10.11817/j.issn.1672-7347.2017.01.001
发布时间
2017-03-31
基金项目
国家自然科学基金(81372904).This work was supported by the National Natural Science Foundation of China
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