Linc-POU3F3对食管癌细胞放射治疗抵抗及肿瘤干细胞标志物的影响
Effect of Linc-POU3F3 on radiotherapy resistance and cancer stem cell markers of esophageal cancer cells
摘要目的:长链非编码RNA(long non-codingRNA,LncRNA)是机体重要的转录及转录后调控分子,近年其与肿瘤细胞恶性表型的关系逐步被揭示,本研究旨在探究垂体特异性转录因子-3相关长链非编码RNA(pit-oct-unc class 3 homeobox 3 related long non-coding RNA,Linc-POU3F3)在食管癌中的表达特征及其与食管癌细胞放射治疗(以下简称放疗)抵抗(radiation resistance,IR)及肿瘤干细胞(cancer stem cells,CSCs)标志物表达的关系.方法:采用生物信息学方法检索公共数据库中Linc-POU3F3在食管癌中的表达特征及潜在的相互作用分子.收集42例食管癌组织样本及相应的癌旁组织,培养人正常食管上皮细胞HEEC及人食管癌细胞ECA109、TE-1、TE-2、TE-13.采用实时荧光定量PCR(qPCR)技术检测食管癌组织及细胞中Linc-POU3F3的表达水平.以梯度递增剂量的射线诱导食管癌细胞系TE-13 IR的形成作为IR组细胞,同等条件以0 Gy剂量处理TE-13细胞系作为对照组(Control)细胞;同时采用细胞转染技术,以实验组细胞为模型构建随机干扰序列组(siControl)细胞及靶向Linc-POU3F3的干扰组(siLinc-POU3F3)细胞,在ECA109细胞中转染空白及过表达Linc-POU3F3载体作为空白组(Vector)及过表达组(oeLinc-POU3F3).采用qPCR技术及蛋白质印迹法分别检测CSCs标志物CD44、CD133及CD90 mRNA及蛋白质的表达水平;四唑化合物MTS[3-(4,5-dimenthylthiazol-2-yl)-5-(3-carboxymethoxyphenyl)-2-(4-sulfophenyl)-2H-tetrazolium,inner salt]检测不同放射剂量下细胞活力;以克隆形成实验验证IR细胞的抵抗能力.结果:生物信息分析结果显示Linc-POU3F3的表达与食管癌患者肿瘤进展及预后不良相关;Linc-POU3F3 mRNA在食管癌组织及细胞系中的表达均显著高于正常癌旁组织及正常细胞(均P<0.01),IR细胞中Linc-POU3F3、CD44、CD 133及CD90 mRNA及蛋白质表达均显著高于Control细胞(均P<0.01);siLinc-POU3F3细胞Linc-POU3F3表达显著低于siControl细胞(P<0.01),抑制率为87.21%,siLinc-POU3F3细胞CD44、CD133及CD90 mRNA及蛋白质表达均显著低于siControl细胞(均P<0.01);oeLinc-POU3F3细胞中Linc-POU3F3、CD44、CD133及CD90 mRNA及蛋白质表达均显著高于Vector细胞;IR细胞相对活力及克隆形成能力在2、4及8 Gy剂量下显著高于Control细胞(均P<0.01);siLinc-POU3F3细胞相对活力在4及8 Gy剂量下显著低于siControl细胞(均P<0.01);oeLinc-POU3F3细胞相对活力在4及8 Gy剂量下显著高于Vector细胞(均P<0.01).结论:Linc-POU3F3在食管癌组织中表达上调,并可促进食管癌细胞IR及CSCs标志物的表达.
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