换一批
换一批截短的食管癌相关基因ECRG4在大肠杆菌中的可溶性表达及纯化
The Soluble Expression and the Purification of Cut-Short Esophageal Cancer Related Gene ECRG4 in Escherichia Coli
摘要目的本实验旨在构建ECRG4的原核表达载体,在大肠杆菌中表达并纯化ECRG4所编码的蛋白,为进一步研究奠定基础.方法将ECRG4基因序列前端编码疏水性跨膜区28个氨基酸的cDNA序列截去,再将截短的cDNA序列克隆到原核表达载体Pet30(+)上,重组表达载体转化感受态表达菌株BL21(DE3),低浓度IPTG低温诱导融合蛋白的表达.采用Western blot鉴定目的蛋白的表达,使用Ni-NTA亲和层析柱进行纯化.结果构建了截短的ECRG4-pET30a(+)基因的原核表达载体,IPTG低温诱导得到大量可溶性蛋白,并且通过亲和层析纯化了重组融合蛋白.结论成功获得了高效表达的、具有一定的生物学活性的ECRG4原核表达产物,并为进一步研究ECRG4的结构和功能打下基础.
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