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基于miR-96/RECK信号通路探讨南蛇藤总萜对食管鳞癌细胞增殖、侵袭的作用机制

Mechanism of action of total terpenoids from Celastrus orbiculatus on the proliferation and invasion of esophageal squamous cell carcinoma cells based on the miR-96/RECK pathway

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摘要目的探讨南蛇藤总萜(TTC)对食管鳞状细胞癌(ESCC)细胞增殖和侵袭的影响,并研究其是否通过调控miR-96/回复引导半胱氨酸丰富蛋白含Kazal基元基因(RECK)通路实现.方法选取人ESCC细胞系KYSE410为研究对象.将KYSE410细胞分为8组,每组设置3个复孔:Ctrl组(无药物处理)、L-TTC组(40 μg/mL的TTC处理24 h)、M-TTC组(80 μg/mL的TTC处理24 h)、H-TTC组(160 μg/mL的TTC处理24 h)、miR-96 NC组(转染阴性对照)、miR-96 NC+TTC组(转染阴性对照,并用160 μg/mL的TTC 处理 24 h)、miR-96 mimic 组(转染 miR-96 mimic)和 miR-96 mimic+TTC 组(转染 miR-96 mimic,并用 160 μg/mL 的 TTC 处理24 h).MTT检测TTC对ESCC细胞活力的影响.平板克隆实验、细胞划痕以及Transwell实验检测KYSE410细胞增殖、迁移和侵袭能力.RT-qPCR检测miR-96表达水平.Western blot检测具有Kazal基序的逆转诱导RECK、基质金属蛋白酶(MMP)-9和MMP-2蛋白表达水平.结果 KYSE410细胞经20、40、80、160 μg/mL的TTC处理后,可显著抑制其细胞活力,并呈剂量依赖性(P＜0.05).与Ctrl组相比,L-TTC组、M-TTC组和H-TTC组的细胞克隆数、穿膜细胞数和细胞迁移率及miR-96 mRNA、MMP-9、MMP-2蛋白表达水平均显著降低(P＜0.05),RECK蛋白表达水平显著增加(P＜0.05),呈剂量依赖性.与miR-96 NC组相比,miR-96 NC+TTC组的miR-96 mRNA表达水平、细胞克隆数、细胞迁移率和穿膜细胞数及MMP-9、MMP-2蛋白表达水平显著降低(P＜0.05),RECK蛋白表达水平增加(P＜0.05).与miR-96 NC组相比,miR-96 mimic组的miR-96 mRNA表达水平、细胞克隆数、穿膜细胞数和细胞迁移率及MMP-9、MMP-2蛋白表达水平显著增加(P＜0.05),RECK蛋白表达水平显著降低(P＜0.05).与miR-96 mimic组相比,miR-96 mimic+TTC组的miR-96 mRNA表达水平、细胞克隆数、穿膜细胞数和细胞迁移率及MMP-9、MMP-2蛋白表达水平显著降低(P＜0.05),RECK蛋白表达水平显著增加(P＜0.05).结论 TTC通过调控miR-96/RECK信号通路,有效下调MMP-9和MMP-2的表达,进而抑制ESCC细胞的增殖、迁移及侵袭能力.