推拿按法通过C纤维调控SIRT1/SGK1表达改善痉挛型脑瘫大鼠神经-肌肉功能障碍的机制研究
Mechanism of tuina pressing manipulation in improving neuromuscular dysfunction in rats with spastic cerebral palsy via C-fiber-mediated regulation of SIRT1/SGK1 expression
摘要目的 观察推拿按法通过C纤维调控组蛋白去乙酰化酶1(SIRT1)/血清和糖皮质激素调节激酶1(SGK1)分子网络,改善痉挛型脑瘫大鼠的神经-肌肉功能障碍,缓解肌痉挛的机制.方法 将50只SD大鼠随机分为正常组10只和造模组40只,使用无水乙醇损毁锥体束法建立痉挛型脑性瘫痪模型大鼠,造模成功后再随机分为模型组、按法组、按法辣椒素组、按法盐水组,每组10只.按法辣椒素组对左侧坐骨神经使用2%辣椒素去C纤维处理,按法盐水组对左侧坐骨神经使用生理盐水对照处理.按法组、按法辣椒素组、按法盐水组在模型制备成功后第2天起按压左侧小腿三头肌与跟腱连接处的腱器官干预,连续干预14 d.采用改良Ashworth量表评估大鼠肢体痉挛程度,Zea Longa量表评估大鼠神经功能缺损程度,HE染色观察锥体束病理学改变,免疫组化观察锥体束中甘氨酸、γ-氨基丁酸(GABA)含量,Western blot和ELISA检测大鼠海马中SGK1、SIRT1蛋白表达,ELISA检测大鼠脊髓中SGK1、SIRT1、细胞外信号调节蛋白激酶1(ERK1)、腺苷酸环化酶1(ADCY1)、钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)含量,软组织张力测定器测定大鼠大腿内侧肌软组织张力D0.2kg数值.结果 干预后,与正常组相比,模型组大鼠改良Ashworth量表、Zea Longa量表评分显著升高(P<0.01),软组织张力D0.2kg显著降低(P<0.01);与模型组相比,按法组、按法辣椒素组和按法盐水组大鼠改良Ashworth量表、Zea Longa量表评分降低(P<0.05或P<0.01),软组织张力D0.2kg显著升高(P<0.01).干预后,与正常组相比,模型组大鼠锥体束中甘氨酸、GABA的AOD值及海马中SIRT1降低(P<0.05或P<0.01),SGK1显著升高(P<0.01),脊髓中ERK、CaMKⅡ、SGK1显著升高(P<0.01),ADCY1、SIRT 1降低(P<0.05或P<0.01);与模型组相比,按法组和按法盐水组大鼠锥体束中GABA的AOD值、海马中SIRT1 升高(P<0.05 或 P<0.01),SGK1 降低(P<0.05 或 P<0.01),脊髓中 ERK、CaMKⅡ、SGK1 降低(P<0.05 或 P<0.01),ADCY1、SIRT1升高(P<0.05或P<0.01).结论 推拿按法刺激腱器官可能通过C纤维调控SIRT1/SGK1分子网络,改善痉挛型脑瘫大鼠的神经-肌肉功能障碍,缓解脑瘫大鼠的肌痉挛状态.
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