基于Hippo/YAP信号通路探讨针康法对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠神经细胞凋亡的影响
The effect of acupuncture-rehabilitation therapy on neuronal apoptosis in neonatal rats with hypoxic-ischemic brain damage based on the Hippo/YAP signaling pathway
摘要目的 探讨针康法调控Hippo/YAP信号通路相关蛋白表达对缺氧缺血性脑损伤(hypoxic-ischemic brain damage,HIBD)新生大鼠神经细胞凋亡的影响.方法 将7日龄Wistar大鼠随机分为假手术组、模型组、针刺组、康复组和针康组.除假手术组外,其余各组均构建HIBD模型.造模成功后,针刺组采用头穴丛刺治疗,康复组进行转笼转棒训练,针康组在头穴丛刺的基础上进行转笼转棒训练,假手术组和模型组同等条件抓取而不进行任何治疗.干预14天结束后,各组大鼠进行神经功能缺损评分;干湿重法检测各组大鼠脑含水量;苏木素—伊红(hematoxylin-eosin,HE)、尼氏染色观察大鼠缺血侧皮质区神经细胞损伤情况;TUNEL染色观察缺血侧皮质区神经细胞凋亡情况;ELISA检测缺血侧皮质区超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)水平;免疫组化法检测缺血侧皮质区凋亡相关蛋白B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)、Bcl-2 相关 X 蛋白(Bcl-2 associated X protein,Bax)阳性表达情况;Western blot法检测缺血侧皮质区Yes相关蛋白(Yes-associated protein,YAP)、磷酸化Yes相关蛋白(phospho-yes-associated protein,p-YAP)、哺乳动物 STE20 样蛋白激酶 1(mammalian sterile 20-like kinase1,MST1)、具有 PDZ 基序的转录共激活因子(transcriptional coactivator with PDZ-binding motif,TAZ)蛋白表达.结果 与假手术组相比,模型组脑组织病理损伤严重,神经功能评分、脑组织含水量、神经细胞凋亡率、MDA、Bax、MST1及p-YAP蛋白表达显著升高(P<0.05),SOD、Bcl-2、YAP、TAZ表达显著降低(P<0.05).与模型组相比,各治疗组神经元结构明显改善,神经功能评分、脑组织含水量、神经细胞凋亡率、MDA、Bax、MST1及p-YAP蛋白的表达显著降低(P<0.05),SOD、Bcl-2、YAP、TAZ表达显著升高(P<0.05).在各治疗组中,针康组与针刺、康复两组相比各指标水平明显改善,差异具有统计学意义(P<0.05).结论 针康法可能通过调控Hippo/YAP信号通路相关蛋白表达抑制HIBD新生大鼠神经细胞凋亡,发挥神经保护作用.
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