基于缺氧诱导因子-1α/血管内皮生长因子信号通路探讨肿瘤藤(星毛冠盖藤)治疗人肝癌细胞移植瘤小鼠的作用机制
Exploring the mechanism of action of the vine(Pileostegia tomentella)in treating HepG2 transplanted tumours in mice via the HIF-1α/VEGFA signaling pathway
摘要目的 观察肿瘤藤对人肝癌细胞(human hepatocellular carcinoma cells,HepG2)移植瘤小鼠的治疗作用,探索肿瘤藤抗肿瘤的作用机制.方法 HepG2 细胞于Balb/c小鼠左侧肩背部皮下接种建立HepG2 移植瘤小鼠模型.将36 只小鼠随机分为模型组、阴性对照组、阳性对照组和肿瘤藤低、中、高剂量组,每组6 只.阴性对照组予以等剂量生理盐水灌胃,阳性对照组予以0.03 g/kg索拉非尼灌胃,肿瘤藤低、中、高剂量组分别予以肿瘤藤 3.4 g/kg、6.8 g/kg、13.6 g/kg灌胃,每天 2次,持续21 天.苏木精—伊红染色法观察HepG2 移植瘤组织病理结构,TUNEL法观察细胞凋亡,免疫组化法观察HepG2 移植瘤组织CASP9、CD31、Ki67、MCM蛋白表达,免疫荧光法观察血管内皮生长因子A(vascular endothelial growth factor A,VEGFA)荧光表达,实时荧光PCR及免疫印迹法观察HepG2 移植瘤组织缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)、VEGFA、CD31 的mRNA及蛋白表达.结果 苏木精—伊红染色结果显示,模型组、阴性对照组移植瘤组织细胞排列紧密,核形不规则,病理性核分裂增多.经治疗后,阳性对照组及肿瘤藤各剂量组移植瘤组织细胞排列变散乱、组织出现大面积凋亡、坏死.TUNEL结果显示,与模型组、阴性对照组比较,阳性对照组和肿瘤藤低、中、高剂量组凋亡细胞数量均明显增多(P<0.05).免疫组化法结果显示,与模型组、阴性对照组比较,阳性对照组和肿瘤藤低、中、高剂量组均能上调CASP9 蛋白表达(P<0.05),以肿瘤藤中剂量组效果最显著(P<0.05);阳性对照组和肿瘤藤低、中、高剂量组均能下调CD31、Ki67、MCM蛋白表达(P<0.05).免疫荧光法结果显示,与模型组、阴性对照组比较,阳性对照组和肿瘤藤低、中、高剂量组均能减少VEGFA荧光强度(P<0.05).实时荧光定量PCR与免疫印迹法结果显示,与模型组、阴性对照组比较,阳性对照组和肿瘤藤低、中、高剂量组均能下调HIF-1α、VEGFA、CD31 的mRNA及蛋白表达(P<0.05),以肿瘤藤中剂量组效果最优(P<0.05).结论 肿瘤藤可能通过调控HIF-1α/VEGFA通路,抑制细胞增殖及血管生成进而促进肿瘤组织凋亡、坏死.
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