换一批
换一批摘要目的:应用酵母双杂交(yeast two hybrid,Y2H)和GST-Pull down技术鉴定肝细胞生成素205(hepatopoietin 205,HP0205)与细胞色素C(cytochrome c,Cytc)间的相互作用.方法:采用PCR技术扩增HP0205和Cytc编码基因,分别将其构建Y2H质粒pDBLeu和pPC86的重组载体.应用Y2H技术将二者的重组质粒共转染酵母MaV203进行鉴定.同时用GST-Pull down方法对其验证.结果:成功克隆HPO205和Cytc编码基因至Y2H载体和相应表达载体,包括pDBLeu-GRER、pDBLeu-CYCS、pPC86-GRER、pPC86-CYCS.经过Y2H鉴定发现.pDBLeu-GRER+pPC86CYCS共转后能激活Ura和His两个报告基因,而pDBLeu-CYCS+pPC86-GRER共转则不能激活任何一个报告基因.GST-Pull down实验显示.GST-CYCS将HP0205沉淀下来,而GST空蛋白不能沉淀HP0205.证实HP0205与Cytc存在相互作用.结论:HP0205可能通过Cytc参与电子传递或/和细胞凋亡过程.
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分类号
R3
栏目名称
基础研究
DOI
10.3969/j.issn.1009-3079.2008.12.005
发布时间
2008-07-16
基金项目
国家自然科学基金
国家高技术研究发展计划(863计划)
国家重点基础研究发展计划(973计划)
安徽省人才基金
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