Gabra3基因敲除对小鼠神经元细胞睡眠功能影响的探究
Investigation of the effects of Gabra3 gene knockout on sleep regulation in mouse neurons
摘要目的 构建Gabra3基因敲除细胞模型,探讨敲除Gabra3基因后小鼠神经元细胞在转录、蛋白水平的变化,研究Gabra3基因敲除后睡眠深度增加的机制.方法 构建多种sgRNA序列,使用CRISPR/Cas9系统敲除鼠源GT1-7神经元细胞系中的Gabra3基因,通过基因测序检测敲除效率,使用TA克隆、蛋白免疫印迹实验验证敲除结果,细胞增殖实验验证敲除表型,并提取总RNA进行转录组测序,提取总蛋白进行蛋白质测序.结合多种生物信息学分析方法,评估Gabra3基因敲除对GT1-7神经元细胞功能的影响.结果 Gabra3基因敲除后,皮质醇和醛固酮的合成与分泌、昼夜节律等通路显著富集,并筛选出BMP2、GLI2、DLL1三个关键基因,蛋白组结果显示Gabra3基因敲除后产生了广泛的扰动.结论 Gabra3基因敲除可能通过调控激素分泌相关基因表达,提高睡眠深度.
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