换一批PEP-1肽介导人Cu,Zn-SOD转导入大鼠离体缺血再灌注损伤心脏
Transduction of Human Cu, Zn-Superoxide Dismutase Mediated by PEP-1 Peptide into Isolated Rat Hearts with Ischemia Reperfusion Injury
摘要目的:构建原核表达载体pET15b-PEP-1-SOD1,观察PEP-1-SOD1融合蛋白在大鼠离体缺血再灌注损伤心肌组织内的转导能力和转导的目的蛋白是否具有酶活性.方法:构建原核表达载体pET15 b-SOD1和pET15b-PEP-1-SOD1,分别转化大肠杆菌,表达和纯化SOD1和PEP-1-SOD1融合蛋白.采用Langendorff灌流系统,大鼠离体心脏停灌30 min后复灌60 min建立缺血再灌注损伤模型.实验分为对照组,SOD1组,25,50,100 μmol/L PEP-1-SOD1组.免疫荧光检测PEP-1-SOD1的转导效果, SOD试剂盒检测酶活性.结果:在荧光显微镜下,PEP-1-SOD1融合蛋白预处理组心肌组织中可见特异性的绿色荧光位于心肌细胞胞质内,25 ,50,100 μmol/L组阳性率分别为32.6%,42.5%,60.9%.SOD1蛋白预处理组和对照组未见到绿色荧光.与对照组相比,PEP-1-SOD1各组SOD酶活性均显著增加(P＜0.01),且SOD酶活性与PEP-1-SOD1浓度呈正相关, SOD1组与对照组之间无显著性差异(P＞0.05).结论:PEP-1-SOD1融合蛋白以天然有活性的形式穿透进入大鼠离体缺血再灌注损伤的心肌细胞,且具有剂量依赖性.转导入细胞内的PEP-1-SOD1蛋白具有酶活性.本研究为SOD1治疗由氧化应激所导致的各种疾病提供了一种有效的递送途径.
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DOI
10.3969/j.issn.1671-8852.2007.04.011
发布时间
2007-08-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
国家科技攻关计划（2006030Z）
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