换一批变形链球菌葡糖基转移酶真核表达质粒PcDNA3-gtfB的构建
Construction of Eukaryotic Expression Plasmid pcDNA3-gtfB Expressing Glucosyltransferase B of Streptococcus mutans
摘要目的:构建变形链球菌葡糖基转移酶真核表达质粒pcDNA3-gtfB,为以其作为基因疫苗进行免疫动物实验奠定物质基础.方法:以变形链球菌GS-5全染色体DNA为模板,通过PER方法扩增获得含有多个编码变形链球菌葡糖基转移酶抗原表位的目的基因gtfB,将分离纯化的目的基因和质粒pcDNA3用KpnⅠ、XAoⅠ双酶切,酶切产物在T4DNA连接酶作用下进行体外重组,用改良Hanahan法转化感受态大肠杆菌JMl09,采用氨苄青霉素抗性IJB平板初步筛选阳性克隆子后.抽提重组质粒,进行酶切鉴定,DNA序列测定.结果:经PCR扩增获得的目的基因分子量与预计相同,并定向插入真核表达载体pcDNA3,插入相位正确,未改变目的基因的阅读框架.结论:真核表达质粒pcDNA3-gdB含有多个葡糖基转移酶免疫显性抗原表位编码基因,且选用的高表达真核表达载体pcDNA3,能直接激活抗原提呈细胞,可以使重组质粒fpcDNA3-gdB具有较强的免疫原性和免疫反应性,为利用其作为基因疫苗防龋奠定了基础.
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