淫羊藿苷促进人牙周膜干细胞增殖及骨向分化的作用

Effects of Icariin promotion on proliferation and osteogenic differentiation of human periodontal ligament stem cells

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摘要目的：??采用体外和体内方法研究淫羊藿苷（ICA）对人牙周膜干细胞（hPDLSCs）增殖及骨向分化的影响。方法??采用体外酶消化组织块法培养hPDLSCs，有限稀释克隆法分离纯化，检测细胞表面标志物以进行鉴定。体外实验：hPDLSCs与1×10-7?mol·L-1?ICA共同培养，用四甲基偶氮唑盐法检测其增殖情况，经碱性磷酸酶（ALP）染色后采用酶联免疫仪检测其骨向分化情况，逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测其成骨基因的表达情况，茜素红染色检测其骨量表达。体内实验：将hPDLSCs和纳米羟磷灰石（nHAC）复合物经1×10-7?mol·L-1?ICA共同诱导培养后，将其植入免疫缺陷小鼠，术后30?d采用组织切片法观察成骨状况。结果??体外实验：1×10-7?mol·L-1?ICA作用于hPDLSCs后，与不含ICA的对照组相比，实验组从培养的第2天开始，hPDLSCs增殖明显；培养3、5、7?d，实验组ALP活性明显升高；培养7?d，成骨基因的相对表达量明显增高；培养14、21、28?d，实验组钙化结节的面积明显大于对照组。体内实验：实验组骨量较对照组明显增加。结论??1×10-7?mol·L-1?ICA可以促进hPDLSCs的增殖及骨向分化，提示采用ICA代替常规生长因子应用于牙周组织工程具有一定可行性。