换一批
换一批慢病毒介导过表达端粒酶逆转录酶的人口腔黏膜上皮稳定细胞系的构建
Construction of human mucosa oral epithelial cell lines overexpressing telomerase reverse transcriptase gene mediated by lentivirus
摘要目的 通过慢病毒法建立稳定表达外源性人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因的口腔黏膜上皮细胞(OMECs),探索构建高效、稳定的永生化OMECs细胞系的方法.方法 提取293T细胞总RNA,应用聚合酶链反应(PCR)法扩增hTERT基因全长,构建重组慢病毒载体pLVX-puro-hTERT.包装慢病毒颗粒后感染人正常OMECs,经嘌呤霉素抗性筛选获得阳性克隆,采用实时荧光定量PCR法和Western blot法检测hTERT基因mRNA和蛋白的表达水平.结果 成功构建了pLVX-puro-hTERT过表达慢病毒载体并感染到OMECs中;感染细胞与正常OMECs形态相似,呈铺路石样生长;实时荧光定量PCR和Western blot结果均显示,hTERT在感染细胞中高表达,与正常细胞相比差异有统计学意义(P＜0.05).结论 通过慢病毒法成功建立了过表达hTERT的OMECs稳定细胞系,为构建高效、稳定增殖的人永生化OMECs细胞系奠定了实验基础.
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关键词
口腔黏膜上皮细胞人端粒酶逆转录酶慢病毒载体稳定表达永生化oral mucosa epithelial cellshuman telomerase reverse transcriptaselentivirusstable expressionimmortalization
分类号
Q813
栏目名称
基础研究
DOI
10.7518/hxkq.2016.05.002
发布时间
2016-12-12
基金项目
甘肃省自然科学基金(1308RJZA248)Natural Science Foundation of Gansu Province
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