换一批摘要目的 构建变异链球菌低pH感应系统,原位可视地检测其所处环境的pH.方法 通过聚合酶链反应(PCR)和基因重组技术,克隆得到唾液链球菌57.I的ureⅠ基因启动子片段(pureⅠ)及绿色荧光蛋白(GFP)的编码基因gfp,经过酶切后将两个基因片段连接融合,然后再经双酶切将融合片段与大肠杆菌-变异链球菌穿梭载体pDL278连接,构建出重组质粒pDL278-pureⅠ-gfp.将重组质粒转化到变异链球菌UA159中,使用荧光显微镜观察其在不同pH条件和不同处理时间的单位面积荧光强度.结果目的基因pureⅠ和gfp扩增片段大小分别为450 bp和717 bp,与预期大小相符.构建的重组质粒pDL278-pureⅠ-gfp测序结果与数据库比对完全一致.重组变异链球菌低pH报告菌株PCR扩增片段与预期结果相符.在一定范围内,变异链球菌低pH感应系统单位面积荧光强度随pH值的降低和处理时间的延长而增强.结论 本研究成功构建了变异链球菌低pH感应系统,同时验证了唾液链球菌酸诱导启动子pureⅠ能在变异链球菌中正常发挥功能,为今后研究菌斑生物膜中原位pH的动态变化提供了新方法.
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关键词
变异链球菌唾液链球菌绿色荧光蛋白尿素酶启动子Streptococcus mutansStreptococcus salivariusgreen fluorescence proteinureasepromoter
医学主题词
变异链球菌(Streptococcus mutans)荧光(Fluorescence)唾液链球菌(Streptococcus salivarius)蛋白(Egg White)基因(Genes)
分类号
R780.2（口腔病理学）
栏目名称
DOI
10.7518/hxkq.2017.03.003
发布时间
2017-06-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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