换一批德氏乳杆菌保加利亚亚种β-半乳糖苷酶基因在大肠杆菌中的非融合表达
β-Galactosidase Gene from Lactobacillus delbrueckii subsp, bulgaricus Gets Non-fusion Expression in Escherichiacoli
摘要目的 在大肠杆菌中非融合表达德氏乳杆菌保加利亚亚种β-半乳糖苷酶,为构建能高效表达β-半乳糖苷酶的食品级益生菌株奠定基础.方法 选择德氏乳杆菌保加利亚亚种(1.1480和wch9901)β-半乳糖苷酶基因(lacZ)起始密码ATG上游-18 bp到ATG下游1 bp的一段包含SD位点和ATGA位点的序列为上游引物,PCR扩增lacZ,插入表达质粒pMG36e构建重组表达质粒.转化大肠杆菌,筛选阳性克隆,提取重组质粒进行酶切鉴定和测序,并测定转化菌β-半乳糖苷酶活性.结果 重组质粒酶切鉴定合格;其中插入的外源片段序列与德氏乳杆菌保加利亚亚种lacZ标准序列符合率达99%以上;携带重组质粒pMG36e-lacZ 1.1480的大肠杆菌DH5a酶活性为3.074 U/mL,酶比活性为6.939 U/mg pro;携带重组质粒pMG36e-lacZ wch9901的大肠杆菌DH5a酶活性为4.755 U/mL,酶比活性为8.537 U/mg pro.结论 成功在大肠杆菌中非融合表达了德氏乳杆菌保加利亚亚种β-半乳糖苷酶;本研究选择的SD位点和ATGA位点能在大肠杆菌中有效地引导蛋白的非融合表达.
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DOI
10.3969/j.issn.1672-173X.2008.04.006
发布时间
2008-09-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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