换一批FUS1和IL-12双基因真核共表达质粒的构建及对A549细胞促凋亡作用研究
Construction and Identification of Eukaryotic Co-expression Plasmid Carrying FUS1 and Recombinant Human IL-12 Genes and Its Effection on Apoptosis of A549 Cells
摘要目的 构建FUS1和人IL-12双基因真核共表达质粒并在肺癌A549细胞中检测基因表达及诱导细胞凋亡作用.方法 采用RT-PCR技术从人肺成纤维细胞MRC-5中逆转录扩增全长FUS1基因,通过PCR技术从pORF-hIL-12质粒中扩增含双亚基的全长IL-12基因.FUS1和IL-12分别经酶切后定向插入真核细胞双顺反子载体pVITRO2的多克隆位点中,酶切和测序鉴定双基因共表达质粒pVITRO2-FUS1-IL-12的构建.以pVITRO2-FUS1-IL-12转染肺癌A549细胞,通过RT-PCR、ELISA 和Western blot方法 检测目的 基因的表达,以Hoechst33258染色及流式细胞术验证pVITRO2-FUS1-IL-12在体外的促凋亡作用.结果 酶切和测序分析表明成功构建了双基因真核共表达质粒 pVITRO2-FUS1-IL-12,在转染后的细胞中同时检测到了FUS1和IL-12的表达,两种基因在双基因表达载体上的表达量基本不受影响.双基因共表达质粒pVITRO2-FUS1-IL-12具有明显诱导肺癌细胞凋亡的作用.结论 成功构建pVITRO2-FUS1-IL-12双基因真核共表达质粒,为肺癌的多基因联合治疗提供了又一新的思路和方法.
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分类号
Q819（生物工程应用）
栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.1672-173X.2009.04.001
发布时间
2009-08-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
重大新药创制"科技重大专项（2009ZX09301）
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