淋病奈瑟菌药敏试验刃天青微量稀释法的建立与评价

Establishment and Evaluation of a Resazurin-Based Microdilution Assay for Microbial Sensitivity Test of Neisseria gonorrhoeae

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摘要目的建立一种基于刃天青显色的淋病奈瑟菌药敏试验方法并对其进行评价.方法在肉汤微量稀释法的基础上,添加刃天青作为活细菌指示剂,采用参考株WHO G 进行试验以优化加入刃天青后细菌的培养时间,肉眼观察颜色变化以读取结果.用琼脂稀释法(金标准)和刃天青微量稀释法对3株淋球菌参考株和32株分离株分别进行阿奇霉素、头孢曲松和大观霉素最低抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)的测定,从基本一致性(essential agreement,EA)(反映对MIC值的一致性)、分类一致性(category agreement,CA)(反映对耐药、中介和敏感判定的一致性)、极重大误差(very major error,VME)(反映假敏感性)和重大误差(major error,ME)(反映假耐药性)等指标进行分析,评价刃天青微量稀释法用于淋球菌药敏试验的准确性.CA率和EA率≥90%,VME率和ME率≤3%被认为是可接受的标准.结果加入刃天青后反应6 h读取的结果与琼脂稀释法一致,以此参数建立刃天青微量稀释法.刃天青微量稀释法测量阿奇霉素、头孢曲松和大观霉素MIC结果的EA率分别为97.1%、91.5%和94.3%,CA率分别为88.6%、94.3%和94.3%,VME率均为0%,ME率分别为11.4%、5.7%和5.7%.结论本研究建立的刃天青微量稀释法用于测量抗生素对淋病奈瑟菌MIC时,与琼脂稀释法具有良好的一致性,敏感结果可信度极高,仅通过肉眼观察即可方便读取结果.但应慎重对待耐药结果,需要继续进行参数的优化.