换一批circVRK1靶向miR-4428调控急性淋巴细胞白血病KOCL44细胞增殖及凋亡的分子机制研究
Molecular Mechanism of circVRK1 Regulating the Proliferation and Apoptosis of Acute Lymphoblastic Leukemia KOCL44 Cells by Targeting miR-4428
摘要目的 分析circVRK1和miR-4428在急性淋巴细胞白血病(acute lymphoblastic leukemia,ALL)细胞增殖和凋亡中的关系.方法 体外培养ALL细胞KOCL44,实验分组为:pcDNA、pcDNA-circVRK1、anti-miR-NC、anti-miR-4428、si-NC、si-circVRK1、pcDNA-circVRK1+miR-NC和pcDNA-circVRK1+miR-4428组.qRT-PCR检测细胞circVRK1和miR-4428的表达水平;CCK-8法、流式细胞术分别检测细胞增殖及凋亡;双荧光素酶报告实验检测circVRK1与miR-4428的靶向关系[实验分为circVRK1野生型报告质粒(WT-circVRK1)+miR-NC、WT-circVRK1+miR-4428、circVRK1突变报告质粒(MUT-circVRK1)+miR-NC和MUT-circVRK1+miR-4428组];Western blot检测Ki-67、cleaved caspase-3、cleaved caspase-9蛋白表达量.结果 相较于pcDNA组,pcDNA-circVRK1组的circVRK1表达上调(P<0.05);与转染pcDNA或者转染anti-miR-NC相比,转染pcDNA-circVRK1或anti-miR-4428后,KOCL44细胞活力和Ki-67蛋白表达降低(P<0.05),凋亡率和cleaved caspase-3、cleaved caspase-9蛋白水平增加(P<0.05);circVRK1可负向调控miR-4428的表达,但该作用仅在转染WT-circVRK1的组别中体现;与pcDNA组相比,pcDNA-circVRK1组miR-4428表达降低(P<0.05);与si-NC组相比,si-circVRK1组miR-4428表达增加(P<0.05);与共转染pcDNA-circVRK1+miR-NC相比,共转染pcDNA-circVRK1+miR-4428后细胞活力升高(P<0.05),Ki-67蛋白表达增加(P<0.05),凋亡率和cleaved caspase-3、cleaved caspase-9蛋白水平降低(P<0.05).结论 circVRK1过表达可通过下调miR-4428表达而减弱ALL细胞增殖能力及诱导细胞凋亡.
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