淫羊藿次苷Ⅱ体外抗乙型肝炎病毒的作用及对线粒体分裂的影响
Icariside Ⅱ Inhibits Hepatitis B Virus and Modulates Mitochondrial Fission in vitro
摘要目的 探讨淫羊藿次苷Ⅱ(icariside,ICS Ⅱ)体外抗乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)的作用及对线粒体分裂的影响.方法 采用HBV阳性的肝癌细胞HepAD38作为细胞模型,CCK8法检测ICS Ⅱ的细胞毒性,ELISA和荧光定量PCR法检测ICS Ⅱ以及ICS Ⅱ联合恩替卡韦(entecavir,ENT)作用细胞后乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)、乙型肝炎病毒E抗原(HBeAg)的分泌水平和HBV DNA拷贝量;使用激光共聚焦显微镜和透射电子显微镜观察ICS Ⅱ对细胞线粒体形态和运动的影响;采用Western blot分析ICS Ⅱ作用后细胞线粒体动力学相关关键蛋白的表达水平;采用荧光染色法评估ICS Ⅱ对细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)生成的影响.结果 CCK8结果显示ICS Ⅱ 25 μmol/L作用72 h对细胞增殖无明显影响;ICS Ⅱ显著抑制细胞HBsAg(抑制率54.90%)和HBeAg(抑制率39.65%)的分泌水平(P<0.05),ICS Ⅱ对细胞HBV DNA拷贝量的抑制率为15.19%,ENT对细胞HBV DNA拷贝量的抑制率为34.11%,ICS Ⅱ联合ENT后对HBV DNA拷贝量的抑制率为55.81%(P<0.05);ICS Ⅱ诱导HepAD38细胞线粒体变短,增强线粒体运动(P<0.05);促进线粒体运动相关蛋白Mfn1、Fis1及p-Drp1(ser616)表达升高(P<0.05),Mfn2、Drp1及Drp1(ser 637)表达无明显变化(P>0.05);抑制HepAD38细胞中ROS的产生(P<0.05).结论 ICS Ⅱ抑制HepAD38细胞中HBV的复制,其机制可能与促进细胞线粒体分裂和抑制ROS的产生有关.
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