换一批
换一批抗AFP重链可变区单域抗体融合蛋白的构建、表达及初步鉴定
Construction, expression and identification of anti-human AFP VH single domain antibody fusion protein gene
摘要目的 构建抗甲胎蛋白(AFP)重链可变区(VH)单域抗体融合蛋白基因在大肠杆菌中的表达,并初步鉴定表达产物的活性.方法 从已构建的抗AFP单链抗体(ScFv)的载体中,经PCR扩增出VH 单域抗体基因,再克隆到融合蛋白表达载体pET32a(+)中进行表达;用SDS-PAGE及Western-blot鉴定表达产物;并通过竞争抑制ELISA分析TrxA-VH融合蛋白的结合活性;细胞免疫组化染色分析其内化及结合情况.结果 VH 单域抗体基因全长339 bp,将其克隆到pET32a(+)中,转化大肠杆菌可获得高效表达,Western-blot证实在相应分子质量处,有TrxA-VH融合蛋白的显色条带.经初步纯化和复性后,获得抗AFP的VH单域抗体融合蛋白.竞争抑制ELISA及细胞免疫组化证明,表达产物具有与AFP特异结合的活性.结论 成功构建了抗AFP的VH单域抗体融合蛋白,为临床的应用研究奠定了基础.
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主题词
蛋白(Egg White)单域抗体(Single-Domain Antibodies)基因(Genes)大肠杆菌(Escherichia coli)免疫, 细胞(Immunity, Cellular)
分类号
R392.12
栏目名称
研究论文
DOI
10.3969/j.issn.1006-0103.2007.03.005
发布时间
2007-07-16
基金项目
四川大学校科研和教改项目
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