换一批
换一批以CDNB为探针测定大鼠肝微粒体中GST活性并优化反应体系
The optimization of the determination of the GST enzyme activity in rat liver microsomes with CDNB as probe
摘要目的 以1-氯-2,4-二硝基苯(CDNB)为探针,优化大鼠肝微粒体中谷胱甘肽硫转移酶(GST)催化反应的条件,为准确测定GST活性提供依据.方法 采用Welch Materials Ultimate TM XB C18反相柱(250 mm×4.6 mm,5μ,m),流动相为乙腈-水(7∶3),流速0.8 mL·min-1,检测波长238 nm.首先于0.05 mg· mL-1蛋白浓度下,孵育10 min,检测CDNB能否被GST催化发生反应,然后分别在CDNB及CDNB+ GSH两种反应条件下,比较不同浓度蛋白、孵育时间、底物浓度的反应差异,选出合理反应条件.结果CDNB在选定色谱条件下实现了快速分离,且无内源性干扰.CDNB在GST催化下发生了反应；在不同浓度蛋白、孵育时间、底物浓度下,两种反应条件下CDNB反应存在明显差异(P ＜0.05):CDNB及GSH作为起始条件时反应较少,此外,CDNB反应量与蛋白浓度、孵育时间分别呈线性关系,是优化反应条件的重要依据.结论 采用CDNB测定GST活性时,选择合适的CDNB及GSH反应条件能准确地测定GST活性,可用于GST活性测定及相关动力学分析.
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