换一批玉米小斑病菌C小种毒素诱导玉米离体根冠细胞凋亡的检测
Detection of Apoptosis in Detached Maize Root Cap Cells Induced by HMC-Toxin
摘要将玉米同核异质体不育细胞质CB37及其正常保持系NB37的离体根冠细胞分为4组,其中3组分别用质量浓度50 μg/mL、100 μg/mL和150 μg/mL 的玉米小斑病菌C小种(HMC)毒素诱导,1组用pH 6.5 PBS诱导作为对照,诱导时间分别为1 h、 4 h和7 h.然后采用中性红与伊文思蓝染色、吖啶橙(AO)与溴化乙啶(EB)复染和Hoechst 33258染色3种方法检测玉米根冠细胞的凋亡状况.结果表明:HMC毒素诱导玉米根冠细胞发生凋亡,并出现凋亡小体与染色体边集形态特征.中性红与伊文思蓝染色,只能检测出活细胞和死细胞,且在3种毒素浓度、3种处理时间下,CB37的根冠细胞死亡率均高于NB37;采用AO与EB复染方法,用150 μg/mL HMC毒素处理7 h时,CB37细胞凋亡率达到最高值70.2%,而NB37仅为36.7%;经Hoechst 33258染色后,CB37用150 μg/mL HMC毒素处理7 h时达到最大凋亡率为74.5%,而NB37为30.7%.专效性HMC毒素对C细胞质敏感,在毒素伤害细胞致死过程中,C细胞质的细胞死亡率远高于N细胞质;在诱导细胞凋亡程序中,C细胞质的细胞凋亡率也远高于N细胞质,且其凋亡率随诱导质量浓度和诱导时间的增加而增加;AO、EB复染与Hoechst 33258染色两者相比,细胞凋亡率接近,准确度均高,图像清晰,且费用相当,但前者可以区分早期和晚期凋亡细胞,而后者不能区分.
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