换一批
换一批LRIG1基因功能域载体的构建及亚细胞定位
Construction and Subcellular Localization of pIRES2-EGFP-3XFLAG-LRIG1-ET and p3XFLAG-LRIG1-TC in Humam U251 MG Cell Line
摘要目的构建含LRIG1胞外段+跨膜段(ET)及跨膜段+胞内段(TC)基因的真核表达载体, 并研究它们的亚细胞定位.方法以人LRIG1全长的质粒p3XFLAG-CMV-9-LRIG1为模板, PCR扩增出3XFLAG-LRIG1-ET和LRIG1-TC, 并将之分别亚克隆入真核表达载体pIRES2-EGFP-N1和p3XFLAG-CMV-9中. 酶切和DNA测序鉴定, 脂质体法将构建的质粒转染U251细胞, 观察标记基因荧光蛋白EGFP的表达, 间接免疫荧光检测标记基因3XFLAG的表达. 结果构建的质粒序列正确, 转染细胞后可检测到EGFP和3XFLAG基因的表达; LRIG1-ET和LRIG1-TC均主要表达在U251的胞膜上, 少量表达在胞浆. 结论包含LRIG1亚单位ET和TC的真核表达载体均构建成功, 其表达产物均主要位于胞膜, 少量位于胞浆.
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