换一批
换一批志贺菌TaqMan-MGB探针实时荧光聚合酶链反应快速检测方法的应用研究
Rapid detection of Shigella by real-time fluorescent PCR assay using TaqMan-MGB probes
摘要目的 建立志贺菌TaqMan-MGB探针实时荧光PCR快速检测技术,为从患者、食品和环境中快速分离和鉴定志贺菌提供技术支撑.方法 根据志贺菌ipaH基因序列设计一对特异性引物和TaqMan-MGB探针;通过对PCR扩增体系和反应条件的优化,建立志贺菌TaqMan-MGB探针实时荧光PCR快速检测方法;用添加已知志贺菌浓度的样本验证方法敏感性;用志贺菌标准菌株、分离株以及大肠埃希菌、沙门菌、副溶血性弧菌、金黄色葡萄球菌等致病菌验证方法特异性.结果 用本研究建立的志贺菌TaqMan-MGB探针实时荧光PER检测方法检测志贺菌,其Ct值与模板浓度的对数值具有很好的对应关系(Y=-3.93×log(X)+37.34,R=0.999),最低检测浓度为30 cfu/ml,3株志贺菌标准株,30株志贺菌分离株检测结果均为阳性;而沙门菌、副溶血性弧菌、大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌等91株其他细菌的Ct值均>35或扩增曲线成一平滑直线.与常规分离鉴定方法比较差异无统计学意义(P>0.05,χ2=0.27).对于纯菌和食品样晶整个检测过程仅需2 h和10 h.结论 志贺菌TaqMan-MGB探针实时荧光PCR检测技术具有特异性强,敏感性高,易操作等优点,有很好的应用前景和研究价值.
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主题词
荧光(Fluorescence)方法(Methods)研究(Research)聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction)敏感性与特异性(Sensitivity and Specificity)
分类号
R378.2
栏目名称
DOI
10.3784/j.issn.1003-9961.2009.12.004
发布时间
2010-04-13
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