换一批MGB探针标记-实时荧光PCR方法检测细菌int1基因和ISCR1元件方法的建立
Establishment of a duplex MGB real-time PCR assay for int1 gene and ISCR1 dement detections
摘要目的 建立一种快速、准确检测细菌中ISCR1复合型Ⅰ型整合子的MGB探针二重实时荧光PCR方法.方法 根据ISCR1复合型Ⅰ型整合子中int1基因和ISCR1元件序列设计特异性引物和探针,在多种经常携带有2种多耐药相关基因元件的细菌中检测其特异性;使用含有2种基因元件特异性序列的重组质粒标准品评价建立方法的灵敏度.结果 建立的MGB二重探针实时荧光PCR检测方法特异性好,携带2种基因元件或单独含有ISCR1或者int1的实验菌株均出现相应特异性扩增曲线,对2种基因元件均不含的菌株进行试验扩增时,均未见出现特异性扩增曲线.对2种基因元件都存在的实验菌株的扩增中,亦不存在由于2套引物/探针相互影响而造成的干扰扩增.根据标准质粒样品构建的标准曲线可确定其对int1基因和ISCR1元件的检测灵敏度分别为5.89×101拷贝/μl和4.13×101拷贝/μl.结论 本研究成功建立了MGB二重探针实时荧光PCR快速检测方法.
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关键词
ISCR1复合型Ⅰ型整合子int1基因ISCR1元件实时荧光PCRMGB探针ISCR1 related complex class 1 integronintlISCR1Real-time quantitative PCR assayMGB probe
分类号
Q503（生物化学一般性问题）
栏目名称
DOI
10.3784/j.issn.1003-9961.2017.10/11.022
发布时间
2018-01-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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