换一批
换一批巢式聚合酶链式反应检测脑脊液标本中病原体的方法评价
Evaluation of nested polymerase chain reaction in detection of pathogens in cerebrospinal fluid
摘要目的 探讨巢式聚合酶链式反应(PCR)检测脑脊液标本中病原体的可行性,为疾病的快速临床诊断提供参考.方法 源自细菌16S rRNA基因序列设计的巢式PCR技术方法,包括2对引物,2次PCR扩增,第1对引物首次PCR扩增脑脊液标本提取的核酸DNA,第2对引物再次PCR扩增,其DNA模板为第1轮PCR扩增产物.将第2轮PCR扩增产物进行测序,对序列进行比对分析,从而确定感染的病原体.使用DNA微量分光光度测定布鲁氏菌纯菌核酸DNA,将DNA进行倍比稀释,用于巢式PCR敏感性测试.结果 巢式PCR能够检测的最低限约为1个核酸DNA拷贝数.应用巢式PCR检测40份临床患者的脑脊液标本,扩增结果表明有37份标本获得约1 460 bp的预期扩增条带(不同细菌扩增片段有差异),测序比对结果显示,检出脑膜炎奈瑟菌7份、产碱假单胞菌1份、草假单胞菌22份、嗜麦芽窄食单胞菌2份、肺炎链球菌1份、未知细菌性病原体4份、未检出3份.结论 巢式PCR能够快速检测与鉴定脑脊液标本中的细菌性病原体.
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