我国结核分枝杆菌现代北京基因型菌株Rv3303c～Rv3304的多态性及生理意义研究

Polymorphism of Rv3303c-Rv3304 of Mycobacterium tuberculosis modern Beijing genotype strains and physiological significance in China

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摘要目的分析我国141株结核分枝杆菌现代北京基因型菌株Rv3303c～Rv3304基因间隔区的多态性,探讨Rv3303c～Rv3304基因间隔区的生理意义.方法通过聚合酶链式反应(PCR)及测序技术分析141株结核分枝杆菌现代北京基因型菌株中Rv3303c～Rv3304基因间隔区序列,构建Rv3303c～Rv3304基因间隔区的重组质粒,将重组质粒及空载质粒电转入耻垢分枝杆菌mc2155中,β-半乳糖苷酶(报告基因 lacZ表达产物)活性试验检测报告基因lacZ的表达水平;使用SPSS 25.0软件进行单因素方差分析.结果 141株现代北京基因型菌株中Rv3303c～Rv3304基因间隔区存在376 bp、260 bp和144 bp 3种不同长度序列,分别含有4、2和0个拷贝重复序列,以2个拷贝重复序列为主,占比约95.74％;基于这3种不同拷贝重复序列,构建重组质粒pSD5B-334、pSD5B-332、pSD5B-330,并将重组质粒及空载质粒转入耻垢分枝杆菌中;β-半乳糖苷酶活性检测结果显示,与菌株MSMEG-pSD5B相比,重组菌株MSMEG-334、MSMEG-332、MSMEG-330的β-半乳糖苷酶活性均上升,菌株间的β半乳糖苷酶活性的差异有统计学意义(P＜0.001).结论我国结核分枝杆菌现代北京基因型菌株Rv3303c～Rv3304基因间隔区具有多态性,通过模式菌株验证发现其能显著影响报告基因lacZ的转录.