霍乱弧菌O1群新支系菌株分型噬菌体裂解谱的改变及对VP3敏感性减弱的分子机制研究
Changes of phage lysis spectrum of new lineage of Vibrio cholerae O1 serogroup and molecular mechanism of decreased sensitivity to VP3
摘要目的 研究霍乱弧菌O1群新支系菌株对分型噬菌体的敏感性,探讨菌株对VP3敏感性减弱的分子机制.方法 通过噬菌体裂解实验评价霍乱弧菌O1群新支系菌株对5株分型噬菌体(VP1~VP5)的敏感性;通过噬菌体吸附实验评价VP3与新支系菌株结合的能力;采用序列测定和蛋白空间结构预测分析VP3受体蛋白TolC序列及结构变化;利用细菌双杂交实验定量检测VP3受体结合蛋白Gp44蛋白与TolC蛋白的互作能力.结果 与霍乱第七次大流行代表株N16961相比,霍乱弧菌O1群新支系菌株对分型噬菌体VP1、VP3和VP4敏感性下降,对VP3的吸附能力降低(P<0.01).VP3受体蛋白TolC在新支系菌株中出现不同于O1群El Tor型大流行菌株的氨基酸突变序列型(TolCVC6050-D283S、TolCVC7132-D283S和TolCVC7131-S281R).蛋白空间结构预测提示,新序列型TolC蛋白的loop区空间结构发生了改变.VP3的受体结合蛋白Gp44与TolC新序列型蛋白的互作能力显著降低(P<0.001).结论 霍乱弧菌新支系菌株TolC蛋白氨基酸序列发生改变,使其与VP3的受体结合蛋白Gp44的互作能力显著下降,导致新支系菌株对VP3的敏感性降低.本研究揭示,O1群新支系菌株在环境噬菌体压力下具有生存优势,这对理解霍乱弧菌的遗传多样性和进化特征具有重要意义.
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