换一批土壤样本中炭疽芽孢杆菌检测的免疫磁珠富集前处理研究
Pre-treatment method for immunomagnetic beads enrichment for detection of Bacillus anthracis in soil samples
摘要目的 建立基于免疫磁珠分离技术(IMS)的土壤样本中炭疽芽孢杆菌的快速富集方法.方法 培养炭疽疫苗株芽孢并制备兔多克隆抗体与免疫磁珠(IMBs),通过菌落计数法检测不同种类IMBs对芽孢稀释液与模拟土壤样本中炭疽疫苗株芽孢的富集灵敏度;通过比较模拟土壤样品中炭疽疫苗株芽孢提取效率,确定芽孢抽提液最佳浓度与体积;采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qPCR)评价IMS技术对模拟土壤样本与炭疽芽孢阳性土壤样本中炭疽芽孢的富集与检测效果.结果 使用含0.5％Triton X-100的质量体积浓度为200g/100mL的蔗糖-磷酸盐缓冲液(PBS)作为芽孢抽提液,抽提液与土壤样本悬液体积比为4∶1时,采用差速离心法对芽孢的提取效率最高;DynabeadsTM抗体偶联试剂盒制备的IMBs对稀释液与模拟土壤样本中炭疽疫苗株芽孢的捕获灵敏度可达到102菌落形成单位(CFU)/mL;qPCR法对炭疽疫苗株芽孢杆菌染色体特异基因BA_5345检测结果表明,模拟土壤样本经IMS法处理后,IMS处理组(K+)Ct值比两个磁珠分离对照组(K-、K0)提前4～8个循环;将该方法应用于炭疽芽孢阳性土壤样本的检测,结果显示IMS处理组其3个靶标基因BA_5345、pagA和capC的检测Ct值比对应的磁珠分离对照组(K-、K0)提前约5～8个循环.结论 芽孢抽提液预处理结合IMS技术能够快速有效富集纯化土壤样本中的炭疽芽孢.该方法简单有效,可为应对炭疽疫情的快速检测与溯源分析提供有效的技术支持.
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关键词
炭疽芽孢杆菌兔多克隆抗体免疫磁珠分离技术土壤样本实时荧光定量聚合酶链式反应Bacillus anthracisRabbit polyclonal antibodyImmunomagnetic beads separation techniqueSoil sampleQuantitative real-time polymerase chain reaction
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DOI
10.3784/jbjc.202411130636
发布时间
2025-07-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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