日本血吸虫过氧化物氧化还原蛋白SjPrxⅠ的原核表达及其免疫调节功能

Protein peroxiredoxin-1 of Schistosoma japonicum: expression, purification and its immunoregulation

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摘要目的对日本血吸虫氧化还原蛋白(peroxiredoxin of schistosoma japonicum,SjPrx)的表达、纯化,接种小鼠和体外刺激脾细胞,研究SjPrx Ⅰ在体内外诱导免疫应答的作用及可能机制.方法 GenBank获取SjPrx编码序列,设计合成引物进行PCR扩增;构建质粒,通过转化将构建的重组质粒转入感受态细胞,然后小量扩增菌株,电泳检测克隆成功表达.蛋白质印迹法(western blot,WB)验证融合蛋白后大量表达纯化.将重组SjPrx Ⅰ通过腹腔注射BALB/c小鼠,本科联免疫吸附实验和流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测脾细胞分泌细胞因子.结果成功构建了SjPrx Ⅰ-pET28a质粒,经异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(isopropyl β-D-thiogalactoside,IPTG)诱导表达后得到可溶性SjPrxⅠ,纯化后的SjPrx Ⅰ免疫小鼠,其淋巴细胞高水平表达Th2细胞分泌的IL-4(t =6.69,P＜0.001)、IL-10(z =3.18,P=0.001)和IL-13(t =4.21,P=0.001).结论制备了重组SjPrx Ⅰ,初步认为其具有Th2型免疫调节功能,但并不能显著抑制体内业已存在的Th1的偏移.