换一批肠出血型大肠埃希菌O104∶H4转运蛋白AatA单克隆抗体制备及鉴定
Preparation and identification of monoclonal antibody against EHEC O104 ∶ H4 AatA transporter protein
摘要目的 表达肠出血型大肠埃希菌O104∶H4的融合蛋白GST-AatA,获得单克隆抗体.方法 人工合成肠出血型大肠埃希菌O104∶H4的转运蛋白基因aatA,连接至pMDl8-T载体,转化E coli DH5α,双酶切回收,构建原核表达质粒PGEX-6P-1-GST-AatA,测序鉴定后,转化E.Coli BL21,IPTG诱导表达,SDS-PAGE和Western Blot分析目的蛋白的表达并纯化该重组蛋白.将纯化后的融合蛋白GST-AatA免疫Balb/c小鼠,制备相应单克隆抗体;并对该单克隆抗体的纯度、亚型、效价、特异性进行鉴定和分析.结果 构建的原核表达载体PGEX-6P-1-GST-AatA能表达融合蛋白GST-AatA;亲和层析纯化后融合蛋白GST-AatA纯度达到95％,免疫小鼠后得到相应特异性单克隆抗体.结论 成功制备出一株抗转运蛋白AatA的单克隆抗体,该抗体为IgG1亚型,特异性好,效价高,纯度可达97％.
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医学主题词
蛋白(Egg White)抗体, 单克隆(Antibodies, Monoclonal)大肠(Intestine, Large)抗体(Antibodies)大肠杆菌(Escherichia coli)
分类号
R117（卫生基础科学）
栏目名称
DOI
10.16462/j.cnki.zhjbkz.2017.06.008
发布时间
2017-07-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
广州市科技计划项目（(2014Y2-00090)）
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