换一批GCN5特异性质粒筛选及其对MSCs分化的影响
Screening of plasmids targeted to GCN5 and detection of their effects on MSCs differentiation
摘要目的 筛选有效质粒片段,探讨组蛋白乙酰化平衡对MSCs分化的影响.方法 提取针对GCN5基因的3条shRNA(ZJ1、ZJ2、ZJ3)重组质粒及阴性对照质粒HK,分别转染入经5-aza诱导的MSCs,24 hA荧光显微镜观察细胞、流式细胞仪检测转染效率、Western-blot分析GCN5蛋白表达,ELBA检测组蛋白乙酰化酶活性.结果 质粒转染效率大于20%;ZJ3转染组组蛋白乙酰化酶活性及GCN5蛋白表达量均有明显降低,抑制效率分别为[(49.0±0.6)%,(35.7±0.1)%,P＜0.05];组蛋白乙酰化水平与MSCs分化进程密切相关,质粒ZJ3可有效抑制不同分化阶段MSCs中乙酰化酶水平,抑制效率分别为[(27.0±0.1)%,(26.7±0.1)%,(25.4±0.1)%,P＜0.05].结论 成功筛选出有效质粒片段ZJ3,初步确证GCN5抑制状态可导致组蛋白乙酰化失衡,从而调控MSGs的分化进程,为后期MSCs移植的临床应用奠定实验基础.
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DOI
10.3969/j.issn.1001-6325.2008.06.007
发布时间
2008-08-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
国家自然科学基金（30471837）
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