换一批
换一批新型非病毒载体O-CHCS携带HBD2转染L929细胞及表达产物活性检测
Novel non-viral vector O-CHCS as gene vector for transfecting HBD2 to L929 cells and biological activity detection of expression products
摘要目的 研究O-胆甾醇基壳聚糖(O-CHCS)作为基因载体进行人β防御素-2(HBD2)基因转染小鼠纤维母细胞L929的可行性及检测目的 基因表达产物的生物活性.方法 构建重组质粒pCMV-hBD2,通过O-CHCS介导转染于L929细胞,提取转染细胞总RNA,用RT-PCR检测HBD2基因转录水平;收集转染细胞培养上清液,用Westernblotting检测HBD2基因蛋白的表达;用Kirby-Bauer纸片法检测HBD2抗菌活性,同时以Lipofect脂质体转染试剂作为阳性对照.结果 经过O-CHCS介导转染的L929细胞,目的 基因HBD2在转录水平和蛋白水平均有表达,转染细胞上清液对金黄色葡萄球菌有抑菌圈形成,结果同Lipofect的转染效果基本一致.结论 成功构建了真核表达载体pcMV-hBD2,证实了O-CHCS可以作为基因载体用于目的 基因HBD2的转染,且目的 基因表达产物具有生物活性,为基因工程合成HBD2提供一条经济便捷的途径.
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