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以PPARγ2为靶点的传统中药细胞学筛选方法的建立和应用

Establishment and application ofChinese herbal cytological screening method targeting at PPARγ2

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摘要目的构建含人PPARγ2基因启动子的荧光素酶表达质粒,通过建立稳定转染该质粒的细胞系,建立传统中药细胞学筛选方法.方法首先以pGL3-Basic-Luc和pGL3-Enhancer-Luc为载体构建含不同长度人PPARγ2基因启动子序列的荧光素酶表达质粒.脂质体转染,建立稳定转染上述质粒的3T3-L1细胞系.选取红花和茜草等28种可能具有减肥作用的中药制备成中药水溶性提取物(ECMH),观察不同浓度 ECMH对3T3-L1细胞中荧光素酶表达的影响.结果 pGL3-Enhancer-PPARγ2 625 bp-Luc质粒稳定转染的细胞荧光素酶表达最高,是本底的200倍左右.故采用此细胞系进行传统中药筛选,红花ECMH在10、100和1 000 μg/mL时均可使3T3-L1细胞中荧光素酶的表达明显增加,分别为对照组的1.63倍、1.90倍和2.30倍(P<0.05).在10~1 000 μg/mL荷叶、茜草ECMH也均能促进3T3-L1细胞中荧光素酶的表达,在浓度为1 000 μg/mL时荷叶和茜草对3T3-L1细胞中荧光素酶的表达作用最强,分别为对照组的2.03倍(P<0.01)和2.00倍(P<0.01).结论成功构建pGL3-Enhancer-PPARγ2 625 bp-Luc质粒,并建立稳定转染的3T3-L1细胞系.红花、荷叶和茜草的ECMH能明显促进3T3-L1细胞中人PPARγ2基因启动子的活性,它们可能成为未来潜在的减肥药物.

作者王欣 ^[1] 徐剑 ^[2] 朱惠娟 ^[3] 李乃适 ^[3] 王林杰 ^[3] 阳洪波 ^[3] 龚凤英 ^[3] 潘慧 ^[3] 学术成果认领

作者单位河北北方学院,河北张家口,075000 ^[1] 中国医学科学院中国协和医学院北京协和医院内分泌科卫计委内分泌重点实验室协和转化医学中心, 北京 100730;首都医科大学附属北京天坛医院内分泌科, 北京 100050 ^[2] 中国医学科学院中国协和医学院北京协和医院内分泌科卫计委内分泌重点实验室协和转化医学中心,北京,100730 ^[3]

关键词过氧化物酶体增生物激活受体γ2 中药水溶性提取物质粒构建稳定转染 3T3-L1前脂肪细胞 peroxisome proliferator activated receptor gamma extracts of chinese medical herbs plasmid construction stable transfection 3T3-L1 preadipocytes

医学主题词中草药(Drugs, Chinese Herbal)质粒(Plasmids)转染(Transfection)方法(Methods)荧光素(Fluorescein)

分类号 R58（内分泌腺疾病及代谢病）

栏目名称

研究论文

DOI 10.3969/j.issn.1001-6325.2017.05.008

发布时间 2017-05-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

基金项目

国家自然科学基金（30540036,30771026,81370898）北京市自然科学基金（7082079,7122146）国家临床重点专科建设项目（WBYZ2011-873）北京协和医院项目（PUMCH 2013-020）